Immunodiagnosisの概要
1。基本的なコンセプト
(1) 抗体 (ab) とantigens (ag)
抗体: それは保護タンパク質体内で生成に抗原刺激、ギターベースエフェクターアンプb細胞によって分泌さ脊椎動物で、iggに分割することができる、igm、伊賀、igd、とイガ。 Iggはisotype最高内容で血清や体液、会計のため75% に80%。 Iggは、一次二次によって生成抗体免疫応答、を「メイン力 "体の抗感染とほとんど使用抗体でimmunodiagnosis。
抗原: それ指し物質が生産抗体との任意の物質を誘導することができる免疫応答。 Antigensは外国、高分子、および特定の。 抗原の特異性が意味抗原ことバインドに対応する抗体やエフェクターt細胞、どの化学グループ決定に分子の表面、呼ばantigenic決定。 を抗原の分子量は一般的に> 10kDa、大きな分子重量、強いantigenicity。
(2) polyclonal抗体とモノクローナル抗体
Polyclonal抗体: 自然抗原分子しばしば含有さまざまなantigenic epitopes、この抗原刺激身体の免疫システムのさまざまな活性化b細胞クローンで同じ時間、そして得られた抗体が含まれさまざまな抗体のに対する異なるepitopes、呼ばれているのでpolyclonal抗体。
をモノクローナル抗体は非常に均質抗体によって生成される単一のb細胞クローンのみターゲット特定エピトープ。 それは、一般的に使用して準備hybridoma技術。 ギターベースエフェクターアンプのb細胞性骨髄腫細胞を形成するためにb細胞が融合したhybridomas。 をモノクローナル抗体によって生成することができ培養単一hybridoma携帯細胞の人口に特定ためエピトープ。 を親和性と特異性のモノクローナル抗体は、一般的にpolyclonalのよりも優れ抗体。
(3) 組換え抗体と組換えantigens
組換え抗体: を遺伝的に設計抗体は、使用してvitroで生産抗体遺伝子再結合技術とタンパク質エンジニアリング技術。 抗体の遺伝子シーケンスを取得、構築表現ベクトル、と表現に転送ホスト (酵母など、昆虫細胞、哺乳類細胞、または細菌)。 このように、生産の抗体は免疫システムの制約から解放。 同時に、両方全長抗体とさまざまな抗体断片生成することができ。
組換えantigens: 一般的に、を組換えantigens参照し組換えでタンパク質エッセンスともタンパク質vitroで生産による遺伝子再結合技術とタンパク質エンジニアリング技術。
2。immunodiagnosisの原則
(1) の方法ダブルモノクローナル抗体サンドイッチ
ダブルモノクローナル抗体サンドイッチ方法: を使用に固相キャリアコート1抗体とラベル別ラベルに抗体抗原を検出するテスト、を形成し複雑なのコーティングされたab-ag-ラベルab。 この方法主に検出antigenic物質。
画像クレジット: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(2) 間接的な方法
間接的な方法: を検出方法で固体相キャリアを固定するために使用され抗原とラベル二次抗体。 この方法は、主に検出igg抗体でサンプル。 複雑なコーティングされたagターゲットab-ラベル二次abで抗体を検出するために形成され。
画像クレジット: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(3) キャプチャ方法
キャプチャ方法: を検出方法で固体相キャリアは使用にコート二次抗体と別ひずみのラベル抗原抗体を検出する。 複雑なコーティングされた二次abターゲットab-ラベルag形成され、テスト。 この方法は、主に検出igmで。
画像クレジット: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(4) 競争方法
競争方法: 競争力のあるのバインディングコーティングされた/ラベル抗体とラベル/コーティングされた抗原とテスト抗原。 この方法は、主に検出マイナー分子antigens。
画像クレジット: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
方法1: コート抗体に固相、ラベル抗原、追加サンプル、をテストする抗原抗体ため競合結合サイト、洗浄、出力結果
方法2: コート抗原に固相、ラベル抗体
3.theの開発immunodiagnosis
Immunodiagnosis適用され免疫学理論、技術、意味に診断さまざまな疾患と決定免疫状態。 技術開発、immunodiagnosis施しimmunoelectrophoresis、降水量凝集アッセイ、radioimmunoassay、immunofluorescence、酵素のリンクimmunosorbentアッセイ、immunoturbidimetry、コロイドゴールドと蛍光microsphereラベリング、ブロッティング膜ストリップ、chemiluminescence、タンパク質チップ、microfluidics制御技術とシングル分子検出。
(1) 酵素-リンクimmunosorbentアッセイ (elisa)
酵素のリンクimmunosorbentアッセイ (elisa) は検出方法は、免疫反応原理固定化技術と酵素ラベリング技術。 最初、ポリスチレン使用マルチよくプレートコーティングする抗原/抗体、バインド物質にテストするサンプル、と追加ワサビperoxidase (hrp) またはアルカリphosphatase (ap) 洗浄後にラベル抗体/抗原を形成するように免疫複合体。 を追加し酵素発色性基板と終了するワンストップソリューション反応。 最後に、定性的または定量的に決定サンプルコンテンツによって検体色od。
画像クレジット: https://www.biotekchina.com.cn/アプリケーション/elisa-and-related-immunoassays.html
(2) コロイドゴールド/蛍光immunochromatography
コロイドゴールド: 参照にゴールドソルを1間分散相粒子径と150 nm、と色は橙赤色に赤紫色。
コロイドゴールドimmunochromatography: 検出技術を使用してコロイド金ラベル抗体、使用nitrocellulose膜 (nc膜) に固相キャリアコート抗原/抗体、を使用して毛細管現象の一端から液体クロマトグラフnc膜の膜もう一方の端、同時に、 を免疫反応クロマトグラフィー中に発生した。
蛍光immunochromatography: immunochromatographic検出技術変化にコロイド状ゴールド蛍光microsphereラベルです。
画像クレジット: https://www.researchgate.net/figure/A-The-composition-of-colloidal-gold-test-strip-B-Principle-of-the-CG-test-strip_fig5_340176469
(3) chemiluminescence immunoassay
Chemiluminescence: 光の発光に付属のプロセス化学反応。
Chemiluminescence immunoassay方法: 検出技術を使用してマルチよくプレートまたは磁性粒子として固体キャリアコート抗原/抗体、追加検体とluminophoreにラベル抗原/を形成するように免疫抗体複雑な、洗浄後、化学的に複雑な刺激または基板に光を放出する、と決定内容によって検体の発光強度。
画像クレジット: https://www。sepmag。eu/ブログ/入札/335317/---選択するための2キー理由chemiluminescenceためのimmunoassays
(4) 分類のchemiluminescence immunoassay
分類によってコーティングキャリア: それはに分割プレートchemiluminescenceと磁気粒子chemiluminescence。 現在、プレートchemiluminescenceは排除されている。
発光による分類: 間接に分割発光 (酵素) 、直接発光 (アクリジンエステル、luminol) 、とelectrochemiluminescence。
